流式細(xì)胞周期檢測服務(wù)細(xì)胞周期檢測的原理：

　　PI法是經(jīng)典的周期檢測方法。PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細(xì)胞儀進行分析，就可以得到細(xì)胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強度為1-2之間。

　　細(xì)胞周期內(nèi)有兩個階段為重要：G1到S和G2到M；這兩個階段正處在復(fù)雜活躍的分子水平變化的時期，容易受環(huán)境條件的影響，如果能夠人為地進行調(diào)控，將對深入了解生物的生長發(fā)育和控制腫瘤生長等有重要意義。能夠方便有效地檢測細(xì)胞周期的變化，對于藥物研發(fā)和疾病研究等都具有重要的意義。單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。

　　流式細(xì)胞周期檢測服務(wù)測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、流式細(xì)胞儀法、基于細(xì)胞成像的熒光檢測法等。流式細(xì)胞儀PI染色法檢測細(xì)胞周期的原理：由于細(xì)胞周期各時相的DNA含量不同,通常正常細(xì)胞的G1/G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。

　　PI可以與DNA結(jié)合，其熒光強度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此,通過流式細(xì)胞儀PI染色法對細(xì)胞內(nèi)DNA含量進行檢測時,可以將細(xì)胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應(yīng)的各細(xì)胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細(xì)胞百分率。

　　流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)、流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。流式細(xì)胞儀是應(yīng)用Chemicalbook流式細(xì)胞術(shù)建立起來的儀器裝置。它使細(xì)胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。

　　細(xì)胞凋亡或稱程序性細(xì)胞死亡（Programmed Cell Death ,PCD）是細(xì)胞的生命現(xiàn)象之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)及自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的清除等方面起著十分重要的作用。細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)的失控可導(dǎo)致臨床各種疾病的發(fā)生。如老年性癡呆與神經(jīng)細(xì)胞凋亡過度有關(guān)，自身免疫性疾病和腫瘤與細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。細(xì)胞凋亡有別于細(xì)胞壞死，它有一系列的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變，包括出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細(xì)胞，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine， PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在凋亡的細(xì)胞，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。因此將Annexin-Ⅴ進行熒光素（如FITC、PE）或生物素（Biotin）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-Ⅴ作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

　　小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重，10 h后解剖取胸腺，分離胸腺細(xì)胞。用PBS洗兩遍，調(diào)整待測細(xì)胞的濃度為2×106 /ml，備用。

　　2.  200 μl細(xì)胞懸液加入1 ml冷PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘，棄上清。

　　3.  重復(fù)步驟2兩次。

　　4.  將細(xì)胞重懸于200 μl 標(biāo)記緩沖液。

       1.整個操作過程動作要盡量輕柔，切勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4 ℃下操作。

　　2.  反應(yīng)完畢后要盡快檢測，因為細(xì)胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應(yīng)一小時后熒光強度就開始衰變。

　　3.  Annexin V-FITC是光敏物質(zhì)，在操作時要注意避光。

送樣運輸要求：

需要活細(xì)胞(只接武漢本地樣本，外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光，一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注，否則按照無熒光處理，如果因此導(dǎo)致檢測結(jié)果不可用及樣本浪費，我方概不負(fù)責(zé)，也不接受退單。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實驗室，為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團隊曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作，秉承“為客戶創(chuàng)造價值，為員工實現(xiàn)夢想，為社會創(chuàng)造財富"的經(jīng)營理念，堅持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。